Ruta 65 se centra en el protagonista, Chase, un adolescente del suroeste rural cuyos padres acaban de descubrir que es gay de una forma poco digna. Tras bajarse del autobús de la escuela, huye para enfrentarse a su nueva realidad como individuo salido del clóset y emprende una aventura nocturna a lo largo de un tramo de carretera llamado Ruta 65.